马齿苋功能饮料专利，一种马齿苋功能饮料及其制备方法

今天，乐知网小编 给大家分享 马齿苋功能饮料专利，一种马齿苋功能饮料及其制备方法

马齿苋功能饮料专利，一种马齿苋功能饮料及其制备方法

申请号为201510741297.1、名称为“一种马齿苋功能饮料及其制备方法”的分案申请。

技术领域 本发明属于植物饮料制备技术领域，具体涉及一种马齿苋功能饮料及其制备方法。

背景技术 目前国内市场的马齿苋(拉丁学名：

Portulaca oleracea L。)功能饮料尚未见于销售，但见诸网络、杂志甚至专利申请的很多，且大部分属于一般性功能饮料，其方法主要是在100℃的高温下，用水提取马齿苋本身的氨基酸、不饱和脂肪酸、维生素、马齿苋多糖等有效成分，但是由于其提取温度较高，从而造成有效成分的破坏和流失，而且在存放的过程中容易变质。

中国专利申请“马齿苋饮料及其制备方法”(申请号：200410066930.3)中，公开的马齿苋饮料的原料中含有马齿苋的水浸泡汁、蜂蜜、白糖、醋、柠檬酸；马齿苋的水浸泡汁是采用35-45℃的温水浸泡获得。

该马齿苋饮料虽然的制备中无需高温加热，但制备方法过于粗放，其中的活性成分易变质，稳定性差，保质期较短，所以保健作用极其有限。

所以，市场上需要研发出一种配料合理、制备方法合适且简便、有效成分保存完成的马齿苋饮料。

发明内容 本发明的目的在于提供一种马齿苋功能饮料及其制备方法，该饮料的原料包括马齿苋、叶酸、维生素C、柠檬酸、果胶酶、壳聚糖等，具有增强免疫力、抗衰老的作用，采用低温、生物提取技术，在配方中添加叶酸和维生素C抗氧化成分，与原有的不饱和脂肪酸结合形成新的络合产物，能较好地保留马齿苋的有效成分。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种马齿苋功能饮料，所述马齿苋功能饮料包括以下重量份数比的原料：

上述马齿苋功能饮料，作为一种优选实施方式，所述水为纯净水。

上述马齿苋功能饮料，作为一种优选实施方式，还包括以下重量份数比的原料：

甜味剂 2-15。

上述马齿苋功能饮料，作为一种优选实施方式，原料中还包括甜味剂，所述甜味剂为甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾中的一种或几种的组合；优先地，所述甜味剂为甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾，且甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾之间的重量份数比为：

(0.5-2)：

(0.5-2)：

(1-10)：

(1-10)。

上述马齿苋功能饮料，作为一种优选实施方式，还包括以下重量份数比的原料：

糖 10-5000。

优选地，所述糖为蔗糖。

本发明中的原料具有如下功效：

(1)马齿苋：

含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、膳食纤维、钙、磷、铁、铜、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、尼克酸、维生素C等多种营养成分，尤其是维生素A、维生素C、核黄素等维生素和钙、铁等矿物质。

其ω-3脂肪酸含量在绿叶菜中占首位。

具有重要的药用价值：

清热解毒，散血消肿；治热痢脓血，热淋，血淋，带下，痈肿恶疮，丹毒，痕疬。

用于湿热所致的腹泻、痢疾，常配黄连、木香；内服或捣汁外敷，治痈肿。

亦用于便血、子宫出血，有止血作用。

还具有利水、消肿、降低血压的功能，马齿苋含有大量的钾盐，有良好的利水消肿作用；钾离子还可直接作用于血管壁上，使血管壁扩张，阻止动脉管壁增厚，从而起到降低血压的作用。

马齿苋能消除尘毒，防止吞噬细胞变性和坏死，还可以防止淋巴管发炎和阻止纤维性变化，杜绝矽结节形成，对白癜风也有一定的疗效。

马齿觉还含有较多的胡萝卜素，能促进溃疡病的愈合。

马齿苋对痢疾杆菌、伤寒杆菌和大肠杆菌有较强的抑制作用，可用于各种炎症的辅助治疗，素有“天然抗生素”之称。

马齿苋中含有一种丰富的Y－3脂肪酸，它能抑制人体内血清胆固醇和甘油三酯酸的生成，帮助血管内皮细胞合成的前列腺素增多，抑制血小板形成血栓素A2，使血液粘度下降，促使血管扩张，可以预防血小板聚集、冠状动脉痉挛和血栓形成，从而起到防治心脏病的作用。

(2)叶酸：

是一种水溶性维生素，叶酸最重要的功能就是制造红血球和白血球，增强免疫能力，对婴幼儿的神经细胞与脑细胞发育有促进作用，辅助治疗精神分裂症，预防贫血，胎儿成长所必须的维生素，保护胃肠黏膜。

(3)维生素C：

预防动脉硬化：

可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。

抗氧化剂：

可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。

治疗贫血：

使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。

防癌：

丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。

(4)柠檬酸：

起到了抗氧化剂的作用，能够延长本发明的保质期。

(5)果胶酶：

外观呈浅黄色粉末状。

果胶酶主要用于果蔬汁饮料及果酒的榨汁及澄清，对分解果胶具有良好的作用 (6)壳聚糖：

壳聚糖具有提高免疫、活化细胞、预防癌症、降血脂、降血压、抗衰老，调节机体环境等作用，可用于医药、保健、食品领域。

(7)甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾起到了甜味剂的功效，可以代替蔗糖的使用，有效地控制本发明的含糖量，使本发明适宜高血糖者饮用。

本发明提供的马齿苋功能饮料采用低温、生物提取技术，在配方中添加叶酸和维生素C抗氧化成分，与原有的不饱和脂肪酸结合形成新的络合产物，能较好地保留马齿苋的有效成分。

由于各个原料之间合理配比，协同作用，使本发明具有良好的增强免疫力、抗衰老作用且具有良好的口感。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、马齿苋预处理：

称取新鲜的马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

步骤二、浸提：

将所述经预处理的马齿苋与水混合，进行煎煮处理，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

本步骤的目的主要是为了破坏马齿苋植物表皮纤维，提高制浆率。

步骤三、生化处理：

向所述煎煮后的马齿苋加入纯净水，进行制浆处理，得到浆液；再向浆液中加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，得到酶解浆液。

本步骤的目的为：

一是为了使马齿苋纤维酶化分解，充分提取其中的有效成分，二是提高酶解速度，壳聚糖在其中起到了辅助、催化作用，三是使产品质量更加稳定。

步骤四、过滤澄清：

将所述酶解浆液进行过滤、澄清处理得到清液。

步骤五、调配：

向所述清液中加入叶酸、维生素C、柠檬酸、甜味剂和/或糖、纯净水，得到调配液，即为所述马齿苋功能饮料。

步骤六、成品：

将所述调配液灌装密封，再经杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，作为一种优选实施方式，所述浸提步骤中的所述煎煮处理中，所述马齿苋与水的重量比为1：

(8～12)(比如1：8、1:8.5、1：9、1：9.5、1：10.5、1：11.5)；更优选地，所述马齿苋与水的重量比为1：

10。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，作为一种优选实施方式，所述浸提步骤中的所述煎煮处理中，温度均为50-70℃(比如52℃、55℃、58℃、62℃、65℃、68℃)，时间均为20-40min(比如22min、25min、28min、32min、35min、38min)；更优选地，所述煎煮处理中，温度为60℃，时间为30min。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，作为一种优选实施方式，所述生化处理步骤中，所述制浆处理中，加入所述煎煮后的马齿苋中的纯净水的质量为纯净水总质量的0.01-0.8(比如为0.01、0.05、0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、0.8，优选为0.667。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，作为一种优选实施方式，所述生化处理步骤中的酶解处理的时间为6-12h(比如6.2h、6.5h、7.5h、8.5h、9.5h、、10.5h、11.5h、11.8h)；更优选地，所述酶解处理时间为8h。

上述马齿苋功能饮料的制备方法，作为一种优选实施方式，所述过滤澄清步骤中先将所述酶解浆液过滤得到第一部分清液后，还用纯净水洗净滤饼得到第二部分清洗液，将所述第一部分清洗液与所述第二部分清液混合，以进行下一步骤；上述用于清洗滤饼的纯净水的质量为纯净水总质量的0.0002-0.02(比如为0.0002、0.0003、0.001、0.005、0.01、0.0105，优选为0.01667)。

相比现有技术，本发明的有益效果为：

1、本发明选用具有增强免疫力、抗衰老功能的马齿苋、叶酸和维生素C作为原料，使本发明具有良好的增强免疫力、抗衰老效果。

2、本发明的浸提步骤中，采用较低的蒸煮温度，在生化处理步骤中，采用果胶酶、壳聚糖进行酶解，属于生物提取技术；另外本发明在配方中添加叶酸和维生素C抗氧化成分，与马齿苋中原有的不饱和脂肪酸结合形成新的络合产物，克服了现有技术中有效成分流失的问题，增加了增强免疫力、抗衰老的功能。

3、本专利方法克服了现有技术的不足，在增加了叶酸、维生素C等关键功能成分的同时，抗氧化、耐腐蚀、稳定性大大提高，保质期可以达到10个月以上。

4、本发明的由于各个原料之间合理配比，协同作用，使本发明具有增强免疫力、抗衰老的效果，且具有良好的口感。

具体实施方式 以下实施例对本发明的内容做进一步的详细说明，本发明的保护范围包含但不限于下述各实施例。

下述原料的选材应该符合国家标准或商业行业标准的规定。

实施例1 本实施例的马齿苋功能饮料，包括以下原料：

本实施例的马齿苋功能饮料的制备方法包括以下步骤：

(1)马齿苋预处理步骤：

按照上述配比称取新鲜马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

(2)浸提步骤：

将该经预处理的马齿苋与800g纯净水混合，在60℃下进行煎煮30分钟，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

(3)生化处理步骤：

向该煎煮后的马齿苋中加入2000g的纯净水，制浆后得到浆液；再向该浆液中按照上述配比加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，酶解8小时，得到酶解浆液。

(4)过滤澄清步骤：

将该酶解浆液过滤后取清液；然后用50g纯净水洗净滤饼得清液，合并后得清液250毫升。

(5)调配步骤：

向该清液中按照上述配比加入叶酸、维生素C、柠檬酸、甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾，还有纯净水150g，得到调配液(即为马齿苋功能饮料)。

(6)成品步骤：

将该浓缩液灌装密封，再经紫外线杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

本实施例的马齿苋功能饮料的保质期为12个月。

本实施例的马齿苋功能饮料的实验数据如下。

(1)抗衰老作用实验：

通过建立D-半乳糖小鼠衰老模型，验证本实施例的马齿苋功能饮料的抗衰老作用。

①实验动物分组、造模和处理 昆明种小鼠，体重28-32g。

将60只小鼠随机分为6组，每组10只(雌雄各5只)：

空白组、模型组、阳性组和马齿苋功能饮料组。

空白组：

灌胃等体积生理盐水； 模型组：

颈背部皮下注射D-半乳糖120mg/kg和灌胃等体积生理盐水； 阳性组：

颈背部皮下注射D-半乳糖120mg/kg和灌胃等体积香菇菌多糖100mg/kg； 马齿苋功能饮料组：

颈背部皮下注射D-半乳糖120mg/kg和灌胃200mg/kg上述步骤(5)制备得到的马齿苋功能饮料。

上述均为连续给药30天。

②观察指标与方法、统计方法 A、小鼠胸腺和脾脏指数的测定：

末次给药24h后，称小鼠体重，眼眶取血后处死小鼠，取胸腺、脾脏、肝脏和脑组织并称重，分别测定相关指标。

按“胸腺(mg)/体质量(g)、脾脏(mg)/体质量(g)”计算胸腺指数和脾脏指数。

B、小鼠血MDA含量及SOD活力测定：

将小鼠血液立即离心取其血清，按丙二醛试剂盒说明书操作，于532nm处测定各管吸光度，计算血清中丙二醛含量。

按超氧化物歧化酶试剂盒说明书操作。

于550nm处测定各管吸光度，计算血清中超氧化物歧化酶活力。

C、小鼠肝组织GSH-Px活力测定：

取小鼠肝脏，剔去结缔组织，匀浆器研磨、加预冷的生理盐水制备成10％的组织匀浆。

冷冻离心(2-4℃)，取其上清液，用谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒测定谷胱甘肽过氧化物酶活力。

D、小鼠脑组织CAT活力测定：

取小鼠脑组织，加预冷的生理盐水进行匀浆制备成10％的组织匀浆。

冷冻离心(2-4℃)，取其上清液，用过氧化氢酶试剂盒测定过氧化氢酶活力。

统计学方法：

实验数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 15.0软件系统进行分析，组间比较采用方差分析。

③结果 A、与空白对照组比较，模型组胸腺指数和脾脏指数均有显著性降低(PB、与空白对照组比较，模型组MDA含量有显著性升高，SOD、GSH-Px、CAT活力有显著性降低(P本实施例的马齿苋功能饮料具有良好的抗衰老作用。

(2)增强免疫力作用实验：

为了检验本实施例的马齿苋功能饮料的增强免疫力的效果，进行了动物实验。

实验方法：

择雌性小鼠100只，体重18-22g，分成2组，每组50只；其中，试验组：

在鼠粮和水的基础上，每天上午喂食200mg/kg上述步骤(5)制备得到的马齿苋功能饮料；对照组：

仅提供鼠粮和饮水。

连续喂食30天后，分别进行小鼠溶血空斑试验，小鼠腹腔内巨噬细胞吞噬鸡红蛋白试验，ConA诱导的小鼠细胞脾淋巴细胞增值能力试验。

结果为：

相比较对照组，试验组的小鼠溶血空斑数增加，吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数均升高，ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力均增加，且均具有显著差异。

本实施例的马齿苋功能饮料具有良好的增强免疫力作用。

实施例2 本实施例的马齿苋功能饮料，包括以下原料：

本实施例的马齿苋功能饮料的制备方法包括以下步骤：

(1)马齿苋预处理步骤：

按照上述配比称取新鲜马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

(2)浸提步骤：

将该经预处理的马齿苋与800g纯净水混合，在60℃下进行煎煮30分钟，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

(3)生化处理步骤：

向该煎煮后的马齿苋中加入2000g的纯净水，制浆后得到浆液；再向该浆液中按照上述配比加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，酶解8小时，得到酶解浆液。

(4)过滤澄清步骤：

将该酶解浆液过滤后取清液；然后用50g纯净水洗净滤饼得清液，合并后得清液250毫升。

(5)调配步骤：

向该清液中按照上述配比加入叶酸、维生素C、柠檬酸、甜菊糖苷、阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、蔗糖，还有纯净水150g，得到调配液(即为马齿苋功能饮料)。

(6)成品步骤：

将该浓缩液灌装密封，再经紫外线杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

本实施例的马齿苋功能饮料的保质期为12个月。

按照实施例1的实验方法对本实施例步骤(5)制备得到的马齿苋功能饮料进行抗衰老作用实验和增强免疫力作用试验，可以证明本实施例的马齿苋功能饮料具有良好的抗衰老作用和增强免疫力作用。

实施例3 本实施例的马齿苋功能饮料，包括以下原料：

本实施例的马齿苋功能饮料的制备方法包括以下步骤：

(1)马齿苋预处理步骤：

按照上述配比称取新鲜马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

(2)浸提步骤：

将该经预处理的马齿苋与900g纯净水混合，在50℃下进行煎煮20分钟，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

(3)生化处理步骤：

向该煎煮后的马齿苋中加入4000g的纯净水，制浆后得到浆液；再向该浆液中按照上述配比加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，酶解7小时，得到酶解浆液。

(4)过滤澄清步骤：

将该酶解浆液过滤后取清液；然后用70g纯净水洗净滤饼得清液，合并后得清液350毫升。

(5)调配步骤：

向该清液中按照上述配比加入叶酸、维生素C、柠檬酸，还有纯净水25030g，得到调配液(即为马齿苋功能饮料)。

(6)成品步骤：

将该浓缩液灌装密封，再经紫外线杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

本实施例的马齿苋功能饮料的保质期为12个月。

按照实施例1的实验方法对本实施例步骤(5)制备得到的马齿苋功能饮料进行抗衰老作用实验和增强免疫力作用试验，可以证明本实施例的马齿苋功能饮料具有良好的抗衰老作用和增强免疫力作用。

实施例4 本实施例的马齿苋功能饮料，包括以下原料：

本实施例的马齿苋功能饮料的制备方法包括以下步骤：

(1)马齿苋预处理步骤：

按照上述配比称取新鲜马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

(2)浸提步骤：

将该经预处理的马齿苋与1000g纯净水混合，在50℃下进行煎煮20分钟，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

(3)生化处理步骤：

向该煎煮后的马齿苋中加入4000g的纯净水，制浆后得到浆液；再向该浆液中按照上述配比加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，酶解7小时，得到酶解浆液。

(4)过滤澄清步骤：

将该酶解浆液过滤后取清液；然后用70g纯净水洗净滤饼得清液，合并后得清液350毫升。

(5)调配步骤：

向该清液中按照上述配比加入叶酸、维生素C、柠檬酸，还有纯净水94930g，得到调配液(即为马齿苋功能饮料)。

(6)成品步骤：

将该浓缩液灌装密封，再经紫外线杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

本实施例的马齿苋功能饮料的保质期为12个月。

按照实施例1的实验方法对本实施例步骤(5)制备得到的马齿苋功能饮料进行抗衰老作用实验和增强免疫力作用试验，可以证明本实施例的马齿苋功能饮料具有良好的抗衰老作用和增强免疫力作用。

实施例5 本实施例的马齿苋功能饮料，包括以下原料：

本实施例的马齿苋功能饮料的制备方法包括以下步骤：

(1)马齿苋预处理步骤：

按照上述配比称取新鲜马齿苋，洗净、沥干，得到经预处理的马齿苋。

(2)浸提步骤：

将该经预处理的马齿苋与1200g纯净水混合，在70℃下进行煎煮40分钟，沥干，得到煎煮后的马齿苋。

(3)生化处理步骤：

向该煎煮后的马齿苋中加入3000g的纯净水，制浆后得到浆液；再向该浆液中按照上述配比加入果胶酶、壳聚糖进行酶解处理，酶解7小时，得到酶解浆液。

(4)过滤澄清步骤：

将该酶解浆液过滤后取清液；然后用80g纯净水洗净滤饼得清液，合并后得清液400毫升。

(5)调配步骤：

向该清液中按照上述配比加入叶酸、维生素C、柠檬酸，还有纯净水295720g，得到调配液(即为马齿苋功能饮料)。

(6)成品步骤：

将该浓缩液灌装密封，再经紫外线杀菌、冷却、检验和成品出厂步骤，得到成品。

本实施例的马齿苋功能饮料的保质期为12个月。

马齿苋功能饮料专利，马齿苋中化合物Oleraciamide E及其提取分离方法与应用专利检索

马齿苋中化合物Oleraciamide E及其提取分离方法与应用 申请号 CN201910266938.0 申请日 2019-04-03 公开(公告)号 CN109897077A 公开(公告)日 2019-06-18 申请人 辽宁中医药大学； 发明人 英锡相； 刘锡龙； 张文洁； 徐纹； 顾莹莹； 段阳； 摘要 本 发明 涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从 马 齿苋药材中提取、分离和 鉴别 出的新化合物及其提取分离方法与应用，具体为一种马齿苋中化合物Oleraciamide？E及其提取分离方法与应用。

所述新化合物的提取分离方法依次采用 水 煎煮提取、乙酸乙酯萃取、大孔 树脂 柱层析、 硅 胶柱层析、ODS中压柱及Sephadex？LH-20纯化、液相分离制备，其结构采用UV、IR、HR-ESI-TOF-MS、1H-NMR、13C-NMR及二维核磁波谱解析的方法确定为一种新 生物 碱 类化合物。

该化合物具有潜在的抗炎和抗 肿瘤 作用等活性，新化合物及其盐或衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，为开发新药和开发新成分提供先导物和理论依据。

权利要求 1。马齿苋中化合物？Oleraciamide？E？，分子式为C22H25NO10，

2。如权利要求1所述的马齿苋中化合物？Oleraciamide？E？的提取分离方法，其特征在于，具体步骤为：

步骤1、取马齿苋干燥药材，采用水煎煮提取，水提液过滤，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室温，得药液备用；步骤2、将步骤1中浓缩液用乙酸乙酯反复萃取，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯萃取物；步骤3、将步骤2中乙酸乙酯萃取物经大孔树脂柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，30%乙醇部分蒸干后上硅胶柱，依次采用乙醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；步骤4、将步骤3中所得物再经预处理的ODS柱（Octadecylsilyl，十八烷基硅烷键合硅胶填料）层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，将显色的洗脱部位减压浓缩至干，得浓缩物备用；步骤5、将步骤4中所得浓缩物经预处理的Sephadex？LH-20（羟丙基葡聚糖凝胶），以甲醇等度洗脱，经薄层色谱进行检测，显色，将显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得浓缩物备用；步骤6、对步骤5中所得浓缩物进行HPLC(高效液相)分离制备，以甲醇和0.1%甲酸体积比为27：

73作为流动相，制备得到一个新生物碱类化合物。

3。如权利要求2所述提取分离方法，其特征在于，所述步骤1中水煎煮提取两次，每次煎煮2小时，水用量为药材的10倍。

4。如权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，所述ODS和Sephadex？LH-20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再以初始流动相平衡。

5。如权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，所述步骤2中浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯与浓缩液的体积比为1：1。

6。如权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，所述步骤3中所用乙酸乙酯，及乙酸乙酯和甲醇的体积比为5：1、2：1、1：2、1：4和注水的乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱。

7。如权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，所述步骤4中所用甲醇-水梯度洗脱中甲醇和水的体积比为40：60，60：40和100：0。

8。如权利要求1所述的马齿苋中化合物？Oleraciamide？E？用于制备抗炎和抗肿瘤作用的药物。

说明书全文 [0001] 本发明涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋药材中提取、分离和鉴别出的新化合物及其提取分离方法，具体为一种马齿苋中化合物Oleraciamide？E及其提取分离方法与应用。

[0002] 马齿苋（Portulaca？oleracea？L。），又名长命菜、马苋菜，为马齿苋科植物。

马齿苋耐旱耐涝，且耐光耐阴，分布广泛，资源丰富，作为药食两用的野生植物备受关注，2015版《中华人民共和国药典》中收载马齿苋的干燥地上部分入药，具有清热解毒、凉血止血、止痢等功效，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血等。

[0003] 马齿苋现代药理学研究表明，其具有抗炎止痛、抗菌抗病毒、降血压、降血脂、抗氧化、抗癌、松弛骨骼肌和平滑肌、调节免疫功能等作用。

研究表明马齿苋众多化学成分为其多样的药理作用提供了物质基础，马齿苋主要化学成分包括黄酮类、香豆素、萜类、甾类、生物碱、氨基酸、各种色素类和矿物质类等。

其中生物碱是马齿苋中一类主要的化学成分，目前已报道的生物碱类成分有去甲肾上腺素、多巴胺、少量多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤、N，N-二环己基脲、尿囊素、N-反式-阿魏酰基酪胺；还有环二肽生物碱和酰胺类生物碱：

马齿苋酰胺A-？S。

[0004] 目前从马齿苋中分离出的化学成分大多数是已知的，且结构新颖性较低，因此，对马齿苋中新化合物的开发和分离是亟待需要的。

[0005] 针对上述问题，本发明提供一种Oleraciamide？E及其提取分离方法，具体为从马齿苋中提取的新化合物，经研究发现本发明的新化合物具有抗炎、抗肿瘤的作用，同时提供一种针对本发明新化合物的简便、快速、环保、纯度高的提取分离方法。

[0006] 为实现上述目的，本发明提供以下技术方案。

[0007] 马齿苋中化合物？Oleraciamide？E？，分子式为C22H25NO10，化学结构式为：

。

[0008] ？一种马齿苋中化合物？Oleraciamide？E？的提取分离方法，具体步骤为。

[0009] 步骤1、取马齿苋干燥药材，采用水煎煮提取，水提液过滤，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室温，得药液备用。

[0010] 步骤2、将步骤1中浓缩液用乙酸乙酯反复萃取，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯萃取物。

[0011] 步骤3、将步骤2中乙酸乙酯萃取物经大孔树脂柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，30%乙醇部分蒸干后上硅胶柱，依次采用乙醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用。

[0012] 步骤4、将步骤3中所得物再经预处理的ODS柱（Octadecylsilyl，十八烷基硅烷键合硅胶填料）层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，将显色的洗脱部位减压浓缩至干，得浓缩物备用。

[0013] 步骤5、将步骤4中所得浓缩物经预处理的Sephadex？LH-20（羟丙基葡聚糖凝胶），以甲醇等度洗脱，经薄层色谱进行检测，显色，将显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得浓缩物备用。

[0014] 步骤6、对步骤5中所得浓缩物进行HPLC(高效液相)分离制备，以甲醇和0.1%甲酸体积比为27：

73作为流动相，制备，最终得到本发明所述新化合物。

[0015] 所述ODS的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再以初始流动相平衡。

[0016] 与现有技术相比本发明的有益效果。

[0017] 本发明中所述马齿苋新化合物的分离和药理活性研究未被现有论文期刊所报道；本发明提供来源于马齿苋的新化合物及一种针对本发明新化合物的提取分离方法，采用水 煎煮提取、乙酸乙酯萃取、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS中压柱、Sephadex？LH-20及HPLC进行分离纯化与制备，成功提取分离出新的化合物，该方法操作步骤仅为七步，操作方法简便及快速，提取分离过程主要采用水提取及乙酸乙酯萃取，工艺方法环保，且经该方法分离得到的化合物纯度较高，均大于90%，此外经研究表明以上化合物具有抗炎、抗肿瘤作用，因此本发明新化合物及其盐和衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发 和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗炎、抗肿瘤作用的药物。

[0018] 附图说明：


实施例。

 本发明提供新化合物，分子式为C22H25NO10，命名为Oleraciamide？E，化学结构式为：


所述新化合物根据结构命名为Oleraciamide？E，表1为该新化合物的核磁数据：

1H-NMR与13C-NMR在DMSO中。

本发明新化合物的核磁数据。

Oleraciamide E：

黄绿色粉末，易溶于甲醇，微溶于氯仿。

点样于硅胶薄层板后，喷碘化铋钾试液斑点显橘黄色，提示该化合物为生物碱成分。



将步骤1中所得药液部分蒸干后经硅胶柱层析分离，用乙酸乙酯等度洗脱，其中硅胶为100-200目，40℃以下减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯提取物。

步骤3：

将步骤2中乙酸乙酯提取物经大孔树脂柱分离，采用乙醇-水（0/100，30/70，50/50，70/30，100/0，v/v）梯度洗脱，30%乙醇部分90-100℃下蒸干后经硅胶柱层析分离，其中硅胶为200～300目，依次用乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇（5：1、2：1、1：2、1：4，v：v）及注水的乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，共得到18个部位（即共得到18个瓶，每瓶400mL），经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的1～5洗脱部位，将合并后的1～5部位经40℃以下减压浓缩至干，备用。


将步骤3中所得物再经预处理的ODS中压柱层析分离，其中填料粒度为20～40μm，用甲醇-水（40/60，60/40，100/0，v/v）梯度洗脱（加压，使流速为1mL/min，温度为室温），得到10个部位（即梯度洗脱得10个瓶，每瓶200mL），经薄层色谱进行检测，显色，将显色的1～4部位保留，50℃以下减压浓缩至干，备用。

所述ODS的预处理过程为甲醇浸泡过24h，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再以初始流动相平衡。

 步骤5：

将步骤4中所得显色部位经预处理的Sephadex？LH-20柱层析，以甲醇等度洗脱，得到30个部位（即梯度洗脱得30个瓶，每瓶20mL），经薄层色谱进行检测，显色，将显色的10～15部位合并，50℃以下减压浓缩至干，备用。

所述Sephadex？LH-20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24h，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再以初始流动相平衡。

[0041] 步骤6：

将步骤5中所得显色部位经HPLC分离制备，以甲醇和0.1%甲酸体积比为27：

73作为流动相，检测波长为230，280nm，分离制备得到本发明新生物碱化合物，归一法测定纯度均为90～99%。

[0042] 本发明新化合物的抗炎作用。

[0043] 1、主要材料。

[0044] 1.1、药品和试剂：

实验所用新生物碱化合物由上述方法制备，纯度为90～99%，精密称取，用DMSO稀释至下述各剂量组所需溶液。

DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国Hyclone公司）；青霉素、链霉素（杭州四季青公司）；LPS（美国Sigma公司）；IL-6、TNF-α、PGE2的ELISA试剂盒（美国Cayman公司）；细胞裂解液、Griess试剂（碧云天生物技术有限公司）。

[0045] 1.2？细胞株：

RAW264.7巨噬细胞（美国ATCC细胞库）。

[0046] 1.3？分组：

分为对照组、LPS组和实验组，各一组。

[0047] 2？实验方法。

[0048] 2.1？细胞培养，DMEM高糖培养基，加入l0％的胎牛血清，l％抗菌素(100U/mL？青霉素和100μg/mL？链霉素)，置于37.5%，CO2培养箱中培养。

[0049] 2.2？MTT比色法测定细胞活力，上述三组分别取对数生长期RAW264.7巨噬细胞接种于96孔培养板中，细胞密度为1×104个/mL，每孔100μL，温度37℃，5%CO2条件下培养过夜后，实验组加入不同浓度的本发明新化合物？Oleraciamide？E（1-100μM），孵育1h后向LPS组和实验组分别加入终浓度为1μg/mL的LPS，另设调零组（含DMSO溶媒的培养液），每组设3个复孔，考察加入药物后对细胞的影响。

上述各组细胞培养24h后，在各孔细胞中加入5？mg/mL？MTT？20μL，温度37℃，5%CO2条件下继续孵育4h后，终止培养，吸弃孔内液体，每孔加入100μL二甲基亚砜（DMSO），振荡10min，使细胞内结晶充分溶解，酶标仪570nm波长处测定各孔吸光值。

[0050] 2.3？利用格里斯（Griess）法测定NO的含量，考察本发明新化合物对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO产生量的抑制作用。

小鼠巨噬细胞RAW264.7传代后在含10%胎牛 血清的高糖细胞培养基DMEM中培养，实验组加入不同浓度的本发明新化合物Oleraciamide？E（1-50μM），在37℃，5%CO2条件下孵育1h后用LPS（终浓度为1μg/mL）诱导炎症反应，24h后收集上清液，每组处理重复3孔。

Griess法测定细胞上清液中NO的含量，根据不同浓度本发明新化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响，用以反映NO水平。

[0051] 2.4？ELISA法测定炎症因子IL-6、TNF-α和炎症介质PGE2：

将对数生长期RAW264.7巨噬细胞接种于24孔培养板中，细胞密度为1×105个/mL，每孔1mL，温度37℃，5%？CO2条件下培养过夜，实验组加入本发明新生物碱化合物Oleraciamide？E（1-50μM），培育1h后，在每孔加入LPS（终浓度为1μg/mL），共孵育24h，每组处理重复3孔。

ELISA法测定马齿苋来源新生物碱化合物处理后的RAW264.7巨噬细胞分泌的IL-6、TNF-α和PGE2的含量。

[0052] 3实验结果。

[0053] 实验结果表明本发明特殊化合物对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7的增殖无影响，安全无毒；并可有效抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7所产生过量炎症细胞因子IL-6、TNF-α和炎症介质NO、PGE2，且呈浓度依赖。

[0054] 细胞相对存活率实验结果如表2所示。

[0055] 表2？本发明对RAW264.7巨噬细胞相对存活率的影响。

[0056] 注：

*P[0057] 表3？本发明对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响（均数±标准差，n=3）。

[0058] 注：

*P[0059] ELISA法测定炎症因子IL-6、TNF-α和炎症介质PGE2结果如表4所示。

[0060] 表4：

本发明对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的IL-6、TNF-α和PGE2含量的影响（均数±标准差，n=3）。

[0061] 注：

*P[0062] 本发明新生物碱化合物的抗肿瘤作用。

[0063] 1？主要材料。

[0064] 1.1？药品和试剂：

实验所用新生物碱化合物由上述方法制备，纯度为90～99%，精密称取，用DMSO稀释至下述各剂量组所需溶液。

DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国Hyclone公司）；青霉素、链霉素（杭州四季青公司）。

[0065] 1.2？细胞株：

人结肠癌细胞Caco-2、人乳腺癌细胞MCF-7、人胃癌细胞BGC-823、人肺腺癌细胞SPC-A1、人肝癌细胞BEL-7402、人宫颈癌细胞Hela-229、卵巢癌细胞Ho-8910、人类口腔表皮样癌细胞KB（中科院上海细胞库）。

[0066] 1.3？分组：

分为对照组、实验组和调零组(含DMSO溶媒的培养液)。

[0067] 2？实验方法。

[0068] 2.1？细胞培养，DMEM高糖培养基，加入l0％的胎牛血清，l％抗菌素(100？U/mL？青霉素和100？μg/mL？链霉素)，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

[0069] 2.2？MTI法检测细胞增殖，取对数生长期细胞接种于96孔培养板中，细胞密度为1×104个/mL，每孔100μL，温度37℃，5%CO2条件下培养过夜后，实验组加入不同浓度的本发明新生物碱化合物，每组设3个复孔，加药后置于37℃，5%CO2培养箱中培养48h。

将含药培养液吸去，加入体积比为4：

1的无血清培养液和MTT（终质量浓度为5？mg／mL)共100mL，继续孵育 4h，小心吸去上清液后，每孔加入？DMSO？150μL，放于震荡器上震荡以使结晶完全溶解 （5min），酶标仪在570nm波长下检测各孔的吸光度（A）值。

然后，计算各浓度化合物对细胞生长的抑制率，？抑制率公式：

细胞生长抑制率=(1-A加药孔／A对照孔)×100％，再应用SPSS软件处理数据，将抑制率对药物浓度作曲线，计算IC50值。

[0070] 3？实验结果。

[0071] 实验结果表明本发明新生物碱化合物对人结肠癌细胞Caco-2、人乳腺癌细胞MCF-7、人胃癌细胞BGC-823、人肺腺癌细胞SPC-A1、人肝癌细胞BEL-7402、人宫颈癌细胞Hela- 229、卵巢癌细胞Ho-8910、人类口腔表皮样癌细胞KB、的增殖具有抑制作用，且随药物浓度增大，抑制率也明显升高，即呈浓度依赖。

本发明两种新化合物对上述八种肿瘤细胞IC50值见表5。

[0072] 表5？本发明对肿瘤细胞的抑制作用。

[0073] 综上所述，本发明提供新生物碱化合物及其提取分离方法，依次采用水煎煮提取、乙酸乙酯萃取、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS中压柱层析、Sephadex？LH-20柱层析及HPLC分离制备，成功的分离得到一种新化合物，该方法简便，快速，环保，且经该方法分离得到的化合物纯度较高，由于所得化合物化学结构独特，从常用中药马齿苋中提取出来，其具有抗炎和抗肿瘤作用，因此本发明新生物碱化合物及其盐和衍生物可以作为天然产物开发中药新药，具有广阔的前景。

 

马齿苋功能饮料专利，一种马齿苋功能饮料及其制备方法 的介绍就聊到这里。

更多关于 马齿苋功能饮料专利，一种马齿苋功能饮料及其制备方法 的资讯，可以咨询 乐知网。

(乐知网- 领先的一站式知识产权服务平台，聚焦 专利申请，商标注册 业务)

关键词： 申请专利 专利申请